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elisa試劑盒白介素類(lèi)酶制劑及其底物
凡無(wú)毒性又能呈現(xiàn)有色化學(xué)反應(yīng)的酶，原則上均可作為標(biāo)記用。但作為標(biāo)記抗體用的酶應(yīng)滿(mǎn)足下列要求：
（1）來(lái)源方便，易于純化;
（2）比活性高，性質(zhì)穩(wěn)定;
（3）酶活性和量能
用簡(jiǎn)單方法測(cè)定。目前在免疫酶技術(shù)中常用的酶為辣根過(guò)氧化物酶（HRP）和鹼性磷酸酶（AP），其次還有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋(píng)果酸脫氫酶等。
由于辣根過(guò)氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）比活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以zui常用。HRP廣泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由無(wú)色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多個(gè)同功酶組成，分子量為40,000,等電點(diǎn)為PH3～9,酶催化的zui適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白zui大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以O(shè)D403nm /OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的純度。高純度的酶RZ值應(yīng)在3.0左右（zui高可達(dá)3.4）。RZ值越小，非酶蛋白就越多。值得注意的是，elisa試劑盒白介素類(lèi)純度并不表示酶活性，如當(dāng)酶變性后，RZ值仍可不變。
HRP的催化反應(yīng)需要底物過(guò)氧化氫（H2O2）和供氫體（DH2）。供氫體多為無(wú)色的還原型染料，通過(guò)反應(yīng)可生成有色的氧化型染料（D）。
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